Mouse Liver Operation and Perfusion for Studying Hepatic Metabolism

首先，放置麻醉的 C57 Black/6 JRj 鼠标。仰卧在加热的手术台上。确认对脚趾捏合没有反射反应。

用70%乙醇喷洒鼠标，以防止头发粘在剪刀上。用剪刀在底部做一个腹部切口，从两侧向上切到肋骨，露出腹腔。用棉签将肠道向右移动，露出门静脉。

使用弯曲的镊子，在门静脉下放置两个结扎带，并松散地绑住每个结扎带。接下来，将一根 0.7 毫米的导管插入门静脉。穿孔时，从导管上取下针头，引导导管穿过静脉，直到导管尖端靠近肝脏。

然后，收紧结扎。观察肝脏。设置滚筒泵的流量并连接输液管。

在37摄氏度时开始肝脏的充盈。一旦肝脏变白，用剪刀剪开肋骨和横膈膜。然后，使用细尖镊子，将结扎线置于肝上下腔静脉下方。

接下来，将导管通过心脏右心房插入肝上下腔静脉。穿孔后，取出针头并引导导管穿过更靠近肝脏的静脉。然后，收紧结扎。

连接一根用于收集灌注流出物的管子，并用防水胶带固定所有管子。使用血管夹适配器，将血管夹放在右肾静脉正上方的肝下腔静脉上，以防止坏死混合物。接下来，将灌注流速增加到每分钟 3.5 毫升。

开始计时器和压力记录。用盐水润湿的无菌窗帘覆盖肝脏，平衡30分钟，并测量流出物的体积。平衡 30 分钟后，开始实验，在馏分收集器中收集第一个基线样品。

定期监测气泡捕集器，并在接近空时重新填充灌注缓冲液。在缓冲液样本进入器官之前，以及从插入下腔静脉的收集导管中，通过三通旋塞阀收集缓冲液样本。使用血气分析仪测量收集的样本以确认器官具有代谢活性。

基线灌注 15 分钟后，使用注射泵，以所需的流速通过三通旋塞阀注入测试物质，开始第一次刺激。模拟后，在开始第二次刺激之前收集基线样本 20 到 30 分钟。在灌注肝脏中，尿素的产生在两个刺激期之前具有稳定的基线期，这表明尿素对混合氨基酸的两次连续刺激的反应是一致的。

观察到葡萄糖和非酯化脂肪酸的稳定基础释放。在胰高血糖素输注期间葡萄糖和非ED脂肪酸的强劲增加之前。基础状态和胰高血糖素输注期间的平均值表明胰高血糖素迅速刺激肝糖原分解和脂肪分解。

然而，如果没有稳定的基础期，就不可能将一种尿素反应与另一种尿素反应区分开来。