首先，通过用 70% 乙醇清洁手套、卡盒和培养板来保持无菌。接下来，打开生物打印机的压缩机，然后选择初始化的按钮来初始化打印机。用 70% 乙醇擦拭打印机内部的表面。
使用“打印运行”按钮，加载打印文件并打开打印协议 PDF。在室温下解冻生物墨水、活化剂液体和 50 毫升完全培养基。按照打印方案 PDF 中的说明准备打印墨盒，确保指定隔间中的试剂体积正确。
接下来，向 C1 中加入 1.2 毫升 F3，向 C2 中加入 1.2 毫升 F32，向 C4 中加入 200 微升 F261。从培养箱中取出聚乙烯亚胺和层粘连蛋白包被的板。将板架隔间设置为低调的板。将印版插入打印机的右侧印版支架隔间。
从盘子上取下盖子并将其放入盖子支架中。将打印墨盒放入生物打印机中，然后选择“打印惰性底座”按钮开始打印运行。解冻后，离心谷氨酸能神经元和星形胶质细胞，吸出上清液并将两种细胞类型分别重悬于一毫升完全培养基中。
将 20 微升细胞悬液与相同体积的台盼蓝混合，并对细胞进行计数以确定每种细胞类型的活细胞浓度。接下来，将 300 万个谷氨酸能神经元与 100 万个星形胶质细胞结合在一个 15 毫升的管中，并加入完整的培养基，使最终体积为 8 毫升。离心细胞悬浮液并吸出上清液，而不干扰沉淀。
通过上下移液将沉淀悬浮在200微升活化液F299中。将盖子放在墨盒和培养板上，然后将它们从生物打印机中取出。在生物安全柜中，将 200 微升细胞悬液加入打印墨盒的孔 C3 中。
如前所述，将墨盒重新插入生物打印机并取下盖子。启动打印运行的打印模型阶段。同时，将 2D 控制板上的层压介质更换为完整的介质。
将生物打印靶向板插入生物打印机并取下盖子。开始生物打印靶向过程。出现提示时，从生物打印机上取下靶向板。
使用指南确定可以在板上观察到液滴的位置。将靶向板重新插入生物打印机，重复液滴打印和选择过程。出现提示时，将靶向板更换为细胞培养板。
打印后，将完整的培养基加入所有3D共培养孔中，并在37摄氏度和5%二氧化碳下孵育。最后，处理墨盒和剩余的液体。根据实验室协议。
经过七天的打印，几乎没有单个细胞残留，神经突和星形胶质细胞投射的相互连接束似乎得到了强化。神经突生长在 12 至 156 小时内线性增加。在神经突生长过程中，细胞体簇的大小也增加。
细胞活力分析显示，大约72%的细胞在第四天存活，29%死亡。免疫染色证实了生物打印神经元和星形胶质细胞的健康细胞形态，两种细胞类型都表现出细胞突起的生长。通过谷氨酸受体 2 的免疫染色确认神经元的谷氨酸能表型。
