Preparation of Electrocompetent Agrobacterium tumefaciens Culture for Microalgal Genetic Engineering

首先用 50 毫升高压灭菌的超纯水稀释 0.5 微升根癌农杆菌培养物的过夜培养物。将 10 微升这种稀释的培养物涂抹在溶原性肉汤或 LB 平板上。将板在 28 至 30 摄氏度下孵育 1 至 3 天。

现在，在补充有利福平的 20 毫升 LB 培养基中接种单个菌落。将培养物在 28 至 30 摄氏度下孵育过夜。第二天，在装有 9 毫升过夜培养物的摇瓶中接种 500 毫升普通 LB 培养基。

将培养物放在 28 至 30 摄氏度的振荡器上。孵育并将培养物分成试管后，将冷冻的试管在4摄氏度和4， 000 G下离心15分钟。使用移液管，除去上清液，将每个沉淀重悬于50毫升冰冷水中。

离心并弃去上清液后，将沉淀重悬于每个管中25毫升的冰冷水中。像以前一样离心，然后将沉淀重悬于一毫升冰冷的10%甘油中。现在，在离心之前将所有试管的内容物合并到一个 50 毫升的试管中。

最后，弃去上清液后，将沉淀重悬于400微升冰冷甘油中。