首先，取一个装有小鼠骨髓造血干细胞和祖细胞的小瓶。使用微量移液管，将沉淀重悬于一毫升ACK裂解缓冲液中，并在室温下孵育一至两分钟。通过预润湿的 70 微米电池过滤器将重悬混合物转移到 50 毫升管中。
然后加入 10 毫升 FACS 缓冲液以稀释 ACK 裂解缓冲液。在4摄氏度下以400G离心混合物5分钟，然后首先将沉淀重悬于10毫升FACS缓冲液中，然后用9毫升缓冲液加满。现在，将 10 微升 0.4% 台盼蓝与 10 微升细胞混合在 0.5 毫升试管中，并使用自动细胞计数器对细胞进行计数。
要对细胞进行染色，请在4摄氏度下以400G离心细胞五分钟。首先将沉淀重悬于一毫升缓冲液中，然后用剩余体积加满，将沉淀重悬于FACS缓冲液中，以达到每毫升7个细胞的1乘以10的最终浓度。使用P1000微量移液器，通过35微米的细胞过滤器盖将悬浮液转移到FACS管中。
接下来，准备染色混合物，如图所示。离心后，将细胞悬液重悬于300微升染色剂中，在样品管中混合一种，并在冰上避光孵育15分钟。然后将 300 微升混合物加入样品管中，并在避光的冰上孵育 20 分钟。
将三毫升FACS缓冲液加入单染色和混合染色的样品管中。现在离心细胞悬液。弃去上清液后，将沉淀重悬于500μL的FACS缓冲液中。
准备一个预装有 500 微升收集介质的 1.5 毫升管。校准 FACS 仪器后，向细胞悬浮液中加入 500 μL FACS 缓冲液，然后将 1 毫升样品通过 35 微米的细胞过滤器盖转移到新的 FACS 管中。细胞分选后，将 10 μL 分选的细胞转移到含有 90 μL FACS 缓冲液的新 FACS 管中。
通过离心沉淀细胞悬液，并重悬于含有0.04%BSA的50μL PBS中。将悬浮液转移到 0.2 毫升管中，并向原始管中加入 50 微升含有 BSA 的 PBS 以收集任何剩余的细胞。将细胞转移到 0.2 毫升管中，以达到 100 微升的总体积。
运行初步实验以确定细胞核分离的最佳裂解时间。沉淀细胞核后，将细胞核沉淀重悬于12μL稀释的细胞核缓冲液中。将 2 微升细胞核加入含有 0.4% 台盼蓝和 8 微升含有 0.04% BSA 的 PBS 的试管中，并使用自动细胞计数器对细胞核进行计数。
完成细胞核分离后，将 6 μL 细胞核重悬转移到预装有 150 μL FACS 缓冲液的新 FACS 管中。加入 3 微升 7-AAD，在冰上孵育 5 分钟。
