首先,将 70 毫升预热的 Dulbecco 改良 Eagle 培养基转移到无菌生物安全柜中的培养皿中,并加入浓度为 100 纳米摩尔的地塞米松。组装解剖所需的手术工具,包括光滑、笔直、细尖的镊子。带有锯齿齿的直细尖镊子和直锋利的细剪刀。
解剖后肢外植体。找到安乐死小鼠的髋关节,仰卧在工作台上,垫子下衬有吸收剂。用细剪刀在覆盖大腿近端和前方的皮肤上做一个小切口。
然后用手指将切口拉开以扩大并捏住暴露的大腿。小心地将皮肤向远端拉动,将后肢脱手套至脚踝水平。沿着脚背侧将一个剪刀刀片轻轻插入皮肤下。
然后做一个向脚趾延伸的切口,并继续向远端拉扯皮肤,直到完全去除。放置鼠标以清楚地看到跟腱插入脚踝附近跟骨后侧的跟腱。要去除植物梯田肌腱,请在两个肌腱之间插入光滑细尖镊子的一个尖端。
将尖端从足底肌腱下方的内侧穿过。然后将其拉近端以撕裂足底肌肉。然后使用细尖锯齿镊子,抓住足底肌腱分离的近端并将其向远端拉动以将其完全移除。
在髋关节处,使用细剪刀精确切断骨盆,隔离后肢。用剪刀轻轻取下剩余的骨盆,露出股骨头。在生物安全柜中,将后肢外植体转移到含有细胞培养基和地塞米松的培养皿中。
将培养皿移至培养箱中,并对其进行预处理48小时。