首先,预热足量的无菌培养基,同时鼠后肢外植体的48小时地塞米松预处理即将完成。预处理结束后,将预处理的外植体移至生物安全柜中。对于卸载组,吸出预处理培养基并将外植体转移到新鲜培养皿中。
在将培养基放回培养箱之前,向每个培养皿中加入 70 毫升培养基。为了准备基线张力和静态冲击组的外植体平台,切割砂纸片以匹配夹板的尺寸。对于静态冲击组,剪下编织线的碎片,并沿着线的长度在中间系一个松散的反手结。
撕下铝箔片覆盖每个丙烯酸浴槽,并喷洒70%乙醇。将准备好的组件转移到生物安全柜中。布置组件,例如亚克力浴缸、底座、体积减小插件、夹子和用于平台组装的把手。
将平台组件放入足够体积的二级容器中,以容纳任何潜在的培养基泄漏。将容器浸入至少 10% 漂白剂的溶液中至少一小时。用自来水冲洗漂白剂溶液。
将冲洗后的组件转移到生物安全柜后,使用 M3 螺钉和压缩弹簧将压板固定到把手上。使用 M5 螺钉将夹具牢固地固定到底座上,然后插入 M6 螺钉,直到它们接触压板。通过使用双面胶带粘贴砂纸来增强压板的功能。
关闭把手以促进砂纸与压板的粘附。要装载平台,请完全打开把手并使用镊子小心地将大腿和膝盖放在压板之间。轻轻合上把手以将肢体固定到位。
用镊子抓住暴露的股骨头或脚,调整膝关节屈曲角度,同时逐渐闭合镊子以将其固定到位。对于基线张力组,在闭合握把的同时伸展膝关节。在静态冲击组的情况下,在关闭握把的同时弯曲膝关节。
对于静态冲击组,将绳子的反手结放在远端爪子周围并牢固地拧紧。将绳子穿过外植体下方底座上的槽并穿过夹孔。将底座放入丙烯酸浴中,并将夹子固定在浴槽的顶部边缘。
要背屈脚,请拉动绳子,直到它相对于胫骨至少达到 110 度。当绳子离开夹子时,使用永久性记号笔标记绳子。在此背屈位置拍摄外植体的照片,以便将来量化背屈角。
从设置中取出底座,然后沿着底座上的轨道滑动来安装体积减小插件。将底座放回丙烯酸浴中,然后将夹子重新定位在顶部边缘。使用标记的字符串作为指导。
拉动它以将脚恢复到原来的背屈角度,并使用胶带将绳子固定在浴缸的外部以保持静态的背屈位置。对于基线张力组,一旦外植体位于握把之间,请拍照以量化背屈角。然后将体积减小插件滑到底座上,并将其放入丙烯酸浴中。
向每个平台中加入 125 毫升预热的培养基以浸没外植体。用铝箔覆盖浴缸顶部后,将整个装置放入辅助容器中。将辅助容器移至培养箱并培养 7 天。