首先,将口腔对念珠菌生长呈阴性的小鼠随机分布为九组,每组对应于不同浓度的姜黄素类化合物,有或没有光。在第一天,皮下注射免疫抑制药物泼尼松龙给组的所有成员。从第一天到实验结束,在饮用水中提供浓度为0.83毫克/毫升的盐酸四环素。
第二天,在每块大腿肌肉上肌肉注射氯丙嗪氯化物以镇静小鼠进行口内接种。接下来,将无菌拭子浸入新鲜制备的标准化白色念珠菌悬浮液中。将鼠标置于仰卧位后,用浸湿的棉签擦拭其舌头30秒。
第五天,免费皮下注射泼尼松龙以维持免疫抑制。在第七天,在治疗之前,将麻醉的小鼠置于配备有螺纹的PAD装置上的仰卧位。将线缠绕在门牙上以保持嘴巴张开。
将70μL光敏剂分配到属于C + L +组的每只小鼠的舌背上。然后,将舌头移回口腔内,并将小鼠置于黑暗环境中20分钟作为照射前期。光敏期过后,将LED装置放在舌背上并照亮七分钟。
如图所示,将光敏剂应用于C + L组,并将小鼠置于黑暗中27分钟。治疗后立即擦拭舌背一分钟,使用无菌棉签从舌头中取出白色念珠菌。将每个样品拭子放入装有一毫升无菌盐水的试管中,涡旋一分钟以重悬微生物细胞。
毫不拖延地在 PBS 中连续稀释 10 倍,并将 25 μL 等分试样平板一式两份铺平到 Sabouraud 葡萄糖琼脂板上。将板在 37 摄氏度有氧孵育 48 小时。48 小时后,使用数字菌落计数器确定酵母菌落计数。
计算每只动物的白色念珠菌负荷。在第八天,在对动物实施适当的安乐死后,继续手术切除舌头,在环形之前进行舌头切除,以确保整个舌头被切除。最后,对孤立的舌头进行组织病理学分析。
口腔念珠菌病的小鼠模型显示受感染小鼠舌头上有典型的白色斑块和假膜。抗菌光动力疗法降低了白色念珠菌在 80 微摩尔姜黄素浓度下的活力。未感染动物的舌头显示出正常的健康组织,包括:完整的固有层、基底膜和丝状。
在C-L组中,在角质化上皮层中观察到酵母和细丝。下面的结缔组织中存在轻微的炎症反应。相比之下,用80微摩尔姜黄素介导的抗菌光动力疗法治疗的小鼠在舌上皮的角质化层中具有较少的真菌细胞。