Combining Microscopy with a Stimulant Delivery System to Monitor Live Sperm from an AcroSensE Model Mouse

首先在 35 毫米的盖玻片培养皿上涂上聚-D-赖氨酸或 PDL。为此，在盖玻片培养皿的中心分配 0.5 微升 PDL 液滴。使用 10 微升刻度移液管，将 PDL 液滴涂抹在盖玻片上。

让涂有涂层的盖玻片盘在 37 摄氏度下干燥 10 分钟。为了对从表达AcroSensE的小鼠模型中新收集的精子进行成像，将80微升制备的精子悬浮液加入PDL包被的盖玻片培养皿的中心。然后，慢慢地将三毫升预热至 37 摄氏度的补充、改良的 Whitten 基础培养基添加到培养皿中。

继续使用显微镜与单细胞兴奋剂递送装置的组合进行成像。首先，将装有精子的培养皿安装在显微镜上。然后，使用显微操纵器，将兴奋剂输送系统的毛细管尖端定位在感兴趣的细胞平面上方约100微米和5至10微米处。

将毛细血管放置在距精子头 100 微米以内。接下来，在显微镜上开始成像序列。以高帧速率对精子细胞进行成像，最好大于每秒 10 帧。

开始图像采集 10 秒后，激活单细胞递送系统以递送 10 秒的兴奋剂。继续捕获细胞图像 10 至 15 分钟。以类似的方式，根据屏幕上显示的位置对单个培养皿中的多个细胞进行成像。