大鼠中性粒细胞胞外陷阱（NET）的荧光定量和细胞分析

首先，将 50 μL 分离的大鼠 NET 样品移液到装有 450 μL Tris-EDTA 缓冲液的试管中。现在将 100 μL DNA 标准品和样品移液到 96 孔板中。向孔中加入等体积的检测试剂。

然后将板在室温下孵育两到五分钟，避免暴露在直射光下。将板放入荧光酶标仪中。设置约530纳米的发射光谱和约480纳米的吸收光谱。

将细胞在一微升的细胞核染色剂中孵育 30 分钟。接下来，将细胞在一微升游离DNA菌株中孵育10分钟。轻轻混合荧光染料。

将样品板装入细胞仪。切换到 SYTOX Green 频道，然后选择 HEXT 频道。将照明设置为蓝色 377/447，并将曝光时间调整为 300， 000 微秒。

单击“聚焦设置”，然后单击“自动注册”以自动调整焦点。选择 SYTOX 绿色通道并将照明设置为绿色 483/536。将 SYTOX Green 的曝光时间设置为 30， 000 微秒。

单击“开始扫描”以开始扫描过程。外周和骨髓中性粒细胞之间的 NET 分泌反应相当，无论 PMA 刺激如何。大鼠神经内分泌瘤之间也表现出有限的交联能力。

与 PMA 孵育导致 4 小时后游离 DNA 含量增加 10%，表明触发 NET 形成的倾向更高。