Bioink Preparation, Acoustic Device Assembly, and Viability Analysis of Cell Spheroids

为了制备生物墨水溶液，将适量的C3A细胞悬浮液与灭菌的gelMA溶液混合。用两个微摩尔细胞示踪剂溶液在 37 度下预染 C3A 细胞球体 20 分钟。要洗涤细胞，首先通过离心除去上清液，然后加入新鲜的细胞培养基。

将至少两毫升生物墨水添加到灭菌的声学设备室中。打开函数发生器和功率放大器，启动每个 PZT 探头的驱动，以生成细胞聚集体的 3D 阵列。使用蓝光交联生物墨水 30 秒以创建 3D 水凝胶支架，以声学方式封装组装的细胞聚集体。

接下来，小心地将3D水凝胶支架从腔室转移到培养皿中。使用干净的剃须刀将其切成小块，然后将细胞培养基加入培养皿中。在37摄氏度下，在含有一微升钙am和两微升碘化丙啶的一毫升PBS中孵育不同培养时间点的C3A细胞球体15分钟。

用PBS冲洗嵌入水凝胶支架中的样品两次。对于检索到的球状体，在200G下离心5分钟，并用PBS洗涤两次。使用荧光显微镜观察球体并捕获图像。

细胞聚集体以规则的 3D 点阵图案排列，并带有绿色荧光信号。组装的C3A gelMA聚集体在第三天逐渐整合并形成紧密的球体，并伴有球体直径的增加。细胞球体的活力在第三天前保持良好，但在培养一周后略有下降。

释放的球体保持了良好的球形形态，具有较窄的尺寸分布以及理想的活力和白蛋白表达。