Preparation and Alignment of Drosophila Embryos for Injecting Fluorescently Labeled Antibodies

首先，将 200 只新孵化的成年果蝇放入塑料圆柱形笼子中。用多孔金属网密封笼子的一侧以通风，另一侧用果汁和酵母糊琼脂板密封。在注射当天，用含有最少酵母糊的果汁板替换笼子的琼脂板。

将培养板在25摄氏度下孵育一小时以收集胚胎。然后从笼子中取出盘子以停止产卵，并在 25 摄氏度下再孵育两个小时，以获得两到三个小时的胚胎。要从胚胎中去除蛋壳，请在果汁盘中加入两毫升 50% 漂白剂溶液。

用画笔轻轻地将胚胎从培养皿上移开，将培养皿孵育两分钟，同时每30秒旋转一次，以提高蛋壳去除效率。然后将胚胎和漂白剂混合物倒入70微米的尼龙细胞过滤器中。用水瓶全面冲洗胚胎，以消除任何残留的漂白剂和酵母膏。

使用干净的剃须刀片，切割矩形琼脂糖块并将块放在载玻片上。用画笔将胚胎从过滤器转移到凝胶块上，并通过轻轻刷洗将它们均匀地分布在块的中心线。现在，准备一个镊子，将镊子的两条腿牢固地粘在一起，形成一个尖锐的尖端。

在解剖显微镜下，使用镊子挑选单个胚胎，并沿着凝胶块的延伸边缘对齐它们。在 24 x 50 毫米盖玻片的中点移液 10 微升庚烷胶。使用移液器吸头将胶水涂抹到 0.5 x 3 厘米的矩形区域。

使用扁平的镊子，提起涂有胶水的盖玻片并将其稳定地固定在胚胎上方，确保胶水面以大约 45 度面向胚胎。轻轻地将盖玻片压在凝胶块上，让胚胎接触胶水。迅速释放压力并抬高盖玻片。

然后在新鲜载玻片的中心分配 10 微升水。将胚胎承载盖玻片放在上面，确保胚胎面朝上。之后，在胚条的一端涂抹 40 微升光晕碳油。

调整载玻片的角度，直到光晕碳油覆盖胚胎表面。