首先,选择扁平矩形磁铁来组装条形图案的磁铁组。将 2 毫米厚的硅胶板切割成尺寸为 2 x 8 x 30 毫米的矩形。然后,逐层组装矩形磁铁和硅胶板。
对于点阵图案,组装微型圆柱形磁铁,确保每个磁铁组由 36 个圆柱形磁铁组成,这些磁铁排列在 6 x 6 网格中。要制备细胞培养装置,请使用打孔器在 1 毫米厚的硅胶板上创建一个 1 x 2 厘米的矩形孔。在孔周围修剪硅胶板,以制作一个圆模,孔在中心。
灭菌时,将模具放入超声波清洗机中。用纯水对模具进行消毒 10 分钟。然后,用 75% 乙醇代替水 10 分钟。
将模具在65摄氏度的消毒盒中干燥60分钟。接下来,将灭菌的硅胶模具连接到 25 毫米圆形玻璃细胞载玻片上,轻轻按压模具,使硅胶粘附在玻璃上。将磁铁组放在 6 孔板上,并将细胞培养装置放置在磁铁组的顶部。
为了制备 30 毫摩尔 Gd-DTPA 注射液,将 30 微升 Gd-DTPA 与 470 微升完全细胞培养基混合。要创建细胞模式,将 HUVEC 悬浮液以 200G 离心 5 分钟。并将沉淀重悬于含Gd-DTPA的培养基中。
细胞计数后,使用含Gd-DTPA的培养基将细胞密度调节至每毫升10至5个细胞的约2倍。轻轻混合细胞悬液,并向细胞培养模具的腔中加入 200 微升,以形成充满边缘的液体表面。孵育板3-6小时,直到细胞粘附在底物上。
孵育后,用完整的培养基替换含Gd-DTPA的培养基,并从磁铁组中取出细胞培养装置。要制备用于条纹细胞图案化的细胞培养装置,请用薄板替换装置中的厚硅胶板。如前所述,对第一种类型的细胞进行图案化后,将细胞培养装置从下面的磁铁向右移动 1 毫米。
将相同的图案化过程应用于第二种类型的细胞。并将第三个细胞培养设备从下面的磁铁向右移动 1 毫米。如图所示,对第三种类型的细胞进行图案化。
对所有类型的细胞进行图案化后,用200微升PBS洗涤载玻片两次。最后,用完整的细胞培养基替换PBS。对用Gd-DTPA处理12 h的HUVECs进行的活力测试显示,除了50毫摩尔Gd-DTPA外,细胞活力没有显着降低,这导致了统计学差异,但保留了约90%的活率在多类型细胞图案中,产生了并排条纹和同心点阵的三方细胞图案。