Obtaining Wildtype and Transgenic Zebrafish Larvae and WildType Whole Larvae Dissociation

首先从各自的育种机构中获取野生型和转基因斑马鱼卵。取一个 15 厘米的培养皿，其中含有 HEPES 缓冲的 E3 培养基或 E3。并从所需的斑马鱼繁殖设置中收集适量的受精卵。在 E3 中以 28 摄氏度的适当明暗循环孵化受精卵。

在受精或 dpf 后一天，取出任何未受精的卵子，让受精的卵子发育到 5 dpf。选择转基因斑马鱼幼虫，浓度为1 dpf。在进行整个幼虫解离之前，使用0.016%Tricaine麻醉5个dpf野生型幼虫，并将30个麻醉幼虫转移到含有一毫升10x胰蛋白酶-EDTA溶液的培养皿中。

然后，使用剃须刀片，在培养皿中将幼虫切成小块。将切碎的幼虫转移到装有两毫升10x胰蛋白酶-EDTA溶液的微型离心管中，并将管放在冰上三个小时。每小时用P1000移液器上下移液内容物，以刺激解离。