Hepatocellular Carcinoma Tissue Dissociation for Organoid Culture

要开始组织解离，请从未经治疗的患者中收集一到两立方厘米的肝细胞癌或HTC组织。然后将组织放入组织保存溶液中，并将其保持在4摄氏度，直到处理。现在，在设置为37摄氏度的培养箱中预热超低附着表面细胞培养板一小时。

将基底膜提取物在4摄氏度下解冻过夜。使用手术剪刀，在层流罩内的培养皿上将肿瘤组织切成小块。将这些碎片转移到 15 毫升锥形管中，并加入 5 至 10 毫升基础培养基。

用气压移液管尽可能多地冲洗掉血液。让混合物沉淀一到两分钟，然后去除一些上清液，包括任何血细胞和漂浮的脂肪凝块。接下来，在室温下以300G离心混合物五分钟。

然后小心地提取上清液，并向修剪好的组织中加入五毫升预热的消化溶液。将试管置于 37 摄氏度的转子中，以获得最佳消化效果。初始消化 30 分钟后，使用显微镜寻找小细胞簇。

为了停止消化，向试管中加入五毫升冷的基础培养基。然后使用 100 微米的细胞过滤器筛入新的 50 毫升管中。用冷的基础介质填充试管，以达到 50 毫升的总体积。

接下来，在8摄氏度下以2G离心细胞10分钟。完成后，小心地取出上清液。将沉淀重悬于50毫升冷基础培养基中，以获得用于类器官接种的细胞沉淀。