首先,将 100 毫升蒸馏水倒入含有 4 克糖和 0.8 克琼脂的烧杯中。将混合物加热至100摄氏度,同时不断搅拌。将混合物从火上移开以冷却。
降低热量以保持 80 摄氏度的温度。然后,在搅拌的同时向混合物中加入 7.4 克面粉,然后加入 2.8 克酵母。接下来,将Moldex丙酸溶液加入混合物中,然后将温度冷却至50摄氏度。
加入番石榴植物提取物溶液,然后加入 0.5 克溴酚蓝粉。将准备好的食物混合物倒入培养皿中,直到每个培养皿都装满。餐具冷却至室温后,用盖子密封并存放在 4 摄氏度的冰箱中。
要准备用于测试的小瓶,首先准备二氧化碳罐、带针的二氧化碳吹枪、苍蝇垫、画笔和用于处理苍蝇的显微镜。选择含有至少 10 个果蝇蛹的小瓶,以标准化苍蝇的年龄。要去除成蝇,请倒置小瓶并在棉塞和小瓶侧壁之间插入一根针。
使用二氧化碳吹枪麻醉成年苍蝇,直到它们在棉塞上失去知觉。打开装有70%乙醇的玻璃瓶上方的小瓶,将苍蝇放入其中。用棉塞密封小瓶。
然后,将其在 25 摄氏度下以 60% 的湿度和 12 小时光照和 12 小时黑暗的光照周期孵育。接下来,在孵化后八小时内借助显微镜将苍蝇分为处女雌性和雄性,以防止交配。女性生殖器可以通过其苍白的颜色来识别,而男性生殖器则呈红色。
雄性也可以通过前腿上的性梳子来识别。将分拣好的苍蝇分成两个新鲜的管子,每个性别一个,并在 25 摄氏度下孵育 6-8 天。首先将贴有标签的培养皿堆叠在一起。
将培养皿与染色的食物倒置在吸墨纸上,以吸收多余的液体。然后,用抹刀将每道菜中的食物分成 12 个相等的部分。将一片食物转移到空的培养皿中。
接下来,用二氧化碳麻醉苍蝇,直到它们在棉塞上睡着。小心地将六只健康的苍蝇转移到每个培养皿中。将密封的培养皿放入培养箱中。
为防止苍蝇在实验过程中逃逸,请用胶带固定每个培养皿的顶部和底部盖子。饲养24小时后,再次用二氧化碳麻醉苍蝇。然后,将苍蝇转移到装有70%乙醇的容器中进行处理。
此外,丢弃盘子中剩余的食物。为了便于对培养皿进行定量,请启动 Epson Scan 2 软件,指定文件名,然后执行预览扫描。单独扫描每个培养皿的顶盖和底盖。
使用开源图像编辑器小心地将扫描内容裁剪为图像,以消除任何伪影和食物残渣,然后将裁剪的图像另存为 TIFF 文件。接下来,启动 T.U.R.D. 软件。单击“文件”以创建新的实验文档,为其指定名称,并将其保存在“分析”子文件夹中。
单击“培养皿”选项,然后选择“添加培养皿”以选择要分析的培养皿。将出现一个新窗口,显示所选板的名称以及新的参数设置。将块大小设置为 21,将偏移量设置为 5,将最小大小设置为 20,将最大大小设置为 600。
要确认粪便沉积物检测的准确性,请导航到“孔板”,然后单击“检查所选孔板”,然后单击“图形”和“查看注释图像”。放大图像以查看存款计数。如有必要,取消选择不应包含在分析中的任何沉积物。
在使用 T.U.R.D. 软件进行分析后,通过单击苍蝇数量来调整苍蝇数量。通过单击“Plates”更改组名称,然后单击“编辑组”,然后按“添加”,然后在“组”列中选择适当的组名称。
接下来,单击“分析”,然后单击“描述性统计”,然后选择“组”以分别导出每个复制的数据。将所有生成的电子表格文件保存在同一个指定文件夹中。若要将所有数据编译到单个电子表格中,请打开应用程序 Excel Merge v4。
当系统提示选择包含CSV文件的文件夹的路径时,输入文件夹地址并按两次Enter键以在同一文件夹中创建一个新的电子表格。在包含合并数据的电子表格中添加一个新工作表,以计算所有仿行中每个参数的平均值。利用 VLOOKUP 函数收集所有重复的每个参数的平均值。
启动GraphPad Prism软件并输入数据集名称。将数据从 Excel 电子表格传输到 Prism 数据图表。单击“分析”以选择要分析的数据集,然后按“确定”。选择合适的测试参数,分析P值。
与处女雄性和雌性番石榴提取物相比,正常食物组的粪便沉积物数量、沉积物总面积和IOD均显著高于番石榴提取物。对固体食物消费的跟踪表明,药物供应组和非药物供应组之间的食物消费量没有显着差异。然而,食用洛哌丁胺的雄性果蝇似乎比正常人摄入的食物少。