胶质母细胞瘤小鼠模型中的双光子活体显微镜

首先将C6神经胶质瘤细胞注射到小鼠的浅表脑区域，以创建胶质母细胞瘤的小鼠模型。然后在颅窗上固定一个头杆，让老鼠恢复。之后，将荧光标记的纳米颗粒静脉注射到小鼠体内，以在大脑中进行两个光子成像。

立即打开钛蓝宝石激光器和主系统开关。然后启动草原视图软件。现在将鼠标固定在定制载物台上的双光子显微镜下。

将动物俯卧放在加热垫上，并用胶带固定，不要收缩胸部。在颅窗上滴一滴水并调整焦点。要监测动物的心率和血氧，请将传感器放在后爪上。

调整头部位置。使用 RFP 过滤器，找到所需的成像区域。确定样品方向和视场后，将显微镜从宽视场模式切换到光扫描显微镜模式。

确保 Ti：sapphire 激光器的模式锁定在 920 纳米并打开所有快门。将喘息 PMT 电压调整为 500 至 600 伏。在软件中按实时图像开始成像。

获得清晰的图像后，使用软件和电动载物台在软件中设置图像堆栈的顶部和底部。缓慢增加 pockels 或 PMT 增益，以补偿深度增加时的黑暗。设置保存路径并启动 Z 系列。

堆栈完成后，使用回放来查看堆栈的质量。成像完成后，将动物移至恢复笼中。退出 Prairie 视图，确保保存并传输所有数据，然后关闭计算机和所有硬件。

有限数量的颗粒已经外渗，并且在纳米颗粒给药后 10 分钟在肿瘤细胞附近可见。然而，在纳米颗粒给药后 24 小时，胶质母细胞瘤中可见大量颗粒，提示外渗。