向新生小鼠提供鞘内注射

首先，在处理幼崽时将幼崽移到远离大坝的单独笼子中。在开始注射程序之前，使用解剖显微镜确认椎间隙，或至少确认幼犬椎管的中线。在 25 或 10 微升注射器中装入 10 微升所需的注射物质，如药物制剂、病毒制剂或控制人工脊髓液等。

一旦动物被完全麻醉，如身体运动减少或不存在所证实的那样，轻轻地将幼崽放在显微镜下。用左手食指和拇指小心触诊位于双侧骨盆带之间的中线椎间隙。轻轻旋转尾巴的底部，以帮助识别脊柱的中线。

小心地插入针头，在压痕相交处将其倾斜至 70 至 80 度角，同时确保它与中央矢状面对齐。当针头与骨骼接触时，逐渐将角度减小到大约 30 度，并将针头推进约 2 毫米进入椎间隙。在 50 至 60 秒内缓慢注入最多 10 微升体积。

注射完成后，将针头保持在原位 10 到 20 秒。轻轻旋转取出针头，以免漏水。注射后，将幼犬放在加热垫上 10 到 15 分钟，让幼犬完全恢复并重新加热。

在野生型新生儿中鞘内注射快速绿色立即导致给药溶液的广泛分布。YFP报告小鼠在鞘内注射基于CRISPR-Cas9的基因编辑10天后，在整个大脑中显示出广泛的YFP表达。