牛肺组织的收获、脱细胞化和胃蛋白酶消化用于脱细胞肺细胞外基质水凝胶的形成

1 首先，从 80 摄氏度 3 中取出冷冻的牛肺组织2 ，让它们在室温下解冻。4 用无菌手术刀和剪刀解剖组织 5 去除气管和软骨气道 6 然后将组织切成小块。7 用含有 2% 青霉素和链霉素的超纯水 9 清洗组织 3 次 8。

10 将切碎的组织样品 11 浸入 2% 碘溶液中 1 分钟，12 然后在无菌蒸馏水中连续洗涤 13 两次。14 将组织块转移到 50 毫升的试管中 15 至 15 毫升标记。16 用蒸馏水 17 将试管装满管子顶部，然后在液氮中冷冻 2 分钟。

18 然后立即将试管转移到装有 37 摄氏度水的烧杯 19 中 10 分钟。20 经过 5 次冻融循环后，21 将样品在 30 毫升 22 DNase 溶液中孵育 1 小时 23 在 37 摄氏度下不断搅拌。24 将湿的脱细胞细胞外基质样品 25 在 80 摄氏度下冷冻 24 小时。

26 将冷冻样品转移到冻干器 27 中，并在真空 28 下以干燥模式运行 3 到 4 天，直到完全干燥。29 冷冻干燥后，在含有干冰的研磨装置中将样品 30 研磨成细粉 31。32 用 1% Triton-X-100 33 在 4 摄氏度下轻轻旋转 34 处理肺组织 3 天，35 每 24 小时更换一次溶液。

36 将样品在 DNase 溶液 37 中于 37 摄氏度下孵育 1 小时，并不断搅拌。38 用蒸馏水 39 在不断滚动下清洗纸巾 3 天，40 每 24 小时补充一次水。41 最后一次洗涤后，如前所述进行冻干和冷冻研磨 42。

43 在室温下消化 15 毫克/毫升 44 粉末状脱细胞细胞外基质样品 45 在 1 毫克/毫升胃蛋白酶溶液 46 中，在不断搅拌下消化 48 小时。47 将溶液 pH 值保持在 2 以有效消化。48 将组织消化物以 5， 000 g 离心 10 分钟 49 并去除上清液。