在开始人诱导多能干细胞的肝分化27天后，每孔用2毫升PBS洗涤细胞。使用给定的组分在 ADS 缓冲液中制备酶溶液。在六孔板的每个孔中加入一毫升溶液。
将板在 37 摄氏度的温度下放在旋转振荡器上约两个小时，以将细胞从板上分离出来。在显微镜下确认细胞脱离，然后吸取细胞悬液以分散成单细胞，并将它们收集在含有肝细胞成熟培养基的 50 毫升管中。将细胞悬液以 200G 在 18 摄氏度下离心 5 分钟。
并使用抽吸器，取出上清液。为了对细胞的线粒体进行染色，将沉淀重悬于含有100纳摩尔TMRM的5毫升肝细胞成熟培养基中。将细胞在 37 摄氏度下孵育 30 分钟，同时保护它们免受光照。
再次，将细胞悬浮液离心并将沉淀重悬于含有 2% FBS 的 1 至 5 毫升冷 ADS 缓冲液中。细胞计数后，将 500， 000 个细胞分装到 1.5 毫升试管中，并将其标记为无一抗对照。将剩余的细胞悬液以 200G 在 4 摄氏度下离心 5 分钟，并除去上清液。
每 100 万个细胞添加 100 微升稀释的一抗。将细胞悬液转移到 1.5 毫升管中，并在冰上孵育 50 分钟。孵育后，离心细胞悬浮液，并用含有2%FBS的冷ADS缓冲液洗涤细胞两次。
现在，每 100 万个细胞向一抗、染色或未染色的细胞中加入 100 微升稀释的二抗，并在冰上孵育 30 分钟。再次，离心细胞悬浮液并用含有 2% FBS 的冷 ADS 缓冲液洗涤细胞两次。将细胞重悬于ADS缓冲液中后，通过卡扣帽细胞过滤器过滤它们，并将试管放在冰上。
