通过HEK293T细胞共转染组装 Ha-CoV-2 颗粒，用于定量 SARS-CoV-2 变体

首先将含有热灭活FBS，青霉素和链霉素的HEK293T细胞和DMEM维持在T75烧瓶中。对于细胞计数，将 20 μL 细胞悬液与 20 μL 台盼蓝溶液混合。将 20 微升染料混合细胞悬浮液加入细胞计数室并计数每毫升细胞数。

将HEK293T细胞和 10 毫升完全 DMEM 接种在 10 厘米细胞培养培养皿中。将细胞在37摄氏度的二氧化碳培养箱中孵育过夜。第二天，取出完全培养基，并用 9 毫升 DMEM 无血清培养基代替。

使用给定的病毒颗粒组装化合物，制备共转染混合物。将混合物慢慢加入培养皿中，并在37摄氏度下孵育6小时。孵育后，用完整的DMEM培养基替换无血清DMEM，并继续孵育共转染长达48小时。

然后通过在单层表面反复移液来分离细胞，并将悬浮液转移到15毫升管中。将细胞悬液以 400G 离心 5 分钟。收集上清液并通过0.22微米过滤器。

将含有 Ha-CoV-2 假病毒的滤液储存在 80 摄氏度。