首先，将PDMS微孔模具，抗粘性冲洗液和必要的实验室服装放入组织培养罩中。要清洗 PDMS 微孔模具，请使用 1， 000 微升移液管向每个孔中加入 300 微升抗粘冲洗液。然后离心板，1,620 G三分钟。
使用真空泵和巴斯德移液管吸出溶液。接下来，将所需浓度的500μL细胞悬液放入微孔中，并以1,620G离心板三分钟。将板放入加湿培养箱中以形成球状体。
为了收获球状体，使用 1， 000 微升移液管，将 500 微升完全培养基牢固地加入到每个孔中。在每个象限上上下移液三到四次，以去除 speroid。然后使用移液管轻轻吸入含有球状体的培养基到微量离心管中。
在微量离心管中转移50微升类固醇悬浮液。然后依次加入4臂PEG丙烯酸酯和PEG二硫醇。通过上下移液约10次来混合所得溶液。
为了产生 100 微升 10% 重量体积的 PEG 水凝胶前体溶液，将 20 微升凝胶前体溶液移液在两个衬有石蜡膜的玻璃载玻片之间移液，用 1 毫米硅垫片隔开，并将载玻片与凝胶前体溶液一起孵育以允许凝胶化。水凝胶凝胶凝胶完成后，用刮刀轻轻地将凝胶从分离的载玻片上剥离。将每孔一块凝胶放入 24 孔板中，确保含有球状体的表面朝上。
向每个孔中加入 500 微升完全培养基以完全浸没水凝胶。将多孔板置于加湿培养箱中以培养细胞。所描述的使用微孔模具的技术导致形成具有球形形状和严格控制的多分散性的球体。
对于每个微孔有 3， 300 个细胞的球体，平均椭球体尺寸约为 250 微米，圆度大于 0.8，将值 1 视为完美球体。球体直径取决于微孔尺寸和每个微孔的细胞数量。
