流式细胞术程序测量布氏活锥虫糖体的相对pH值

首先，启动流式细胞仪软件。打开一个新实验。添加所需数量的样本并命名它们。

然后设置 YL2-H 或 RL1-H 通道直方图、前向散射面积与侧向散射面积点图、前向散射面积与前向散射高度点图以及 BL1-H 与 VL2-H 通道点图。将未染色的野生型布氏锥虫对照细胞放在样品进样口上，并调整载物台位置。要减小文件大小，请取消选中不打算录制的通道。

从低流速开始，以便进行调整。然后单击“运行”开始数据采集。微调 YL2 或 RL1 电压，使 10 以内的主峰与第三至 10 对齐到第四相对荧光强度单位。

调整正向散射和侧向散射电压，以确保 90% 以上的事件在点阵图范围内。设置前向散射阈值以排除碎片，而不会遗漏活细胞。修改 VL 2 和 BL 1 通道设置，将未染色野生型对照的初级峰定位在 10 到 2 到 10 到 4 相对荧光强度单位之间。

单击记录并测量至少 10， 000 个事件。然后将第一个用碘化丙啶或噻唑红染色的诱导表达pHluorin的锥虫样品放在样品进样口上。同样，在进行冲洗后以低流速开始数据采集。

监控每个图，以确保正确捕获超过 90% 的事件，并且 VL2-H 和 BL1-H 通道未饱和。将每个样品的数据保存为FCS文件格式，并准备分析。