为每个样品预热 1 毫升 LB 肉汤和 1 LB 加庆大霉素琼脂平板，并在设置为 37 摄氏度的静态培养箱中对照。在 5 微升或更小的组合体积中，将 pTNS2 辅助质粒和 pUC18-Tmini-Tn7-Tlac 庆大霉素 adeIJK 插入质粒各 100 至 200 纳克加入到等分的电感受态细胞中。用指尖轻敲击混合，以确保质粒与电感受态细胞完全混合，而不会引入气泡。
将等体积的无菌蒸馏水加入阴性对照细胞等分试样中，如前所示轻轻混合。将样品在冰上孵育20分钟。将整个细胞样品转移到冰冷的电穿孔比色皿中，然后将比色皿放回冰上。
要对电池样品进行电穿孔，请打开电穿孔器并将其设置为两千伏。用软纸擦拭比色皿表面，以去除任何粘附的冰或水分。将比色皿插入电穿孔器并进行电击。
立即将0.9毫升预热的LB肉汤加入比色皿中的细胞中，并轻轻上下移液以将细胞与培养基混合。在室温下将整个细胞悬液转移到新的 1.5 毫升微量离心管中。然后检查电穿孔仪上的时间常数值。
为获得最佳结果，此值应介于 4 到 6 之间。将电穿孔样品在 37 摄氏度下以 250 RPM 孵育一小时，以允许细胞回收。一小时后，使用接种撒布器将每个样品的100微升撒在预热的LB加庆大霉素琼脂平板上。
将板在 37 摄氏度下孵育 16 至 18 小时。检查电穿孔板。使用无菌牙签，从LB加庆大霉素琼脂平板中取出多达10个单菌落，并将它们贴在新鲜的LB加庆大霉素琼脂平板上。
将板在 37 摄氏度下孵育 16 至 18 小时。将转化板菌落贴到选择性培养基上可保留转化菌株，并为菌落PCR筛选提供起始材料。用于筛选引物的PCR产物ABglmS2正向新物和Tn7反向物为382个碱基对。
该反应的阴性对照包括野生型鲍曼不动杆菌ATCC 17978、AB 258和无模板。
