首先，将整个PEG沉淀的腺相关病毒HEK293培养物转移到一个大的锥形管中。在4摄氏度下以2,820g离心培养物15分钟。弃去上清液，并将沉淀重悬于15毫升含有钙和镁的PBS中。
将重悬部分转移到 50 毫升管中。加入 10 毫升 PBS 以收集剩余的 PEG 沉淀物，并将其全部转移到 50 毫升管中。然后加入 40 微升 DNase I，并在 37 摄氏度下孵育一小时。
使用玻璃巴斯德移液管，用 15.5 毫升浓缩细胞裂解物填充 25 毫米 x 89 毫米的多异构体管。使用新的玻璃巴斯德移液管，在细胞裂解物下方轻轻注入 9 毫升 15% 碘克沙醇溶液。然后加入5毫升25%和40%碘克沙醇溶液。
最后，加入五毫升 60% 碘克沙醇溶液。使用注射器在管子上加满 PBS，确保在不干扰碘克沙醇层的情况下去除大多数气泡。使用电气管顶密封管。
检查碘克沙醇梯度的不同层是否清晰可见。使用490,000g的非摆动转子在16摄氏度下离心管1小时10分钟。离心后，将试管组装在金属扣中。
将 19 号针头连接到注射器上。接下来，使用 30 号针头在管子顶部进行穿刺，让针头插入。小心地刺穿40%60%碘克沙醇界面下方的管子，如酚红指示剂所示。
确保针斜面朝向 40% 层。用非惯用手取出 30 号针头，同时缓慢提取病毒-碘克沙醇混合物。大约一半时，旋转针头使斜面朝下，然后继续提取，避免从蛋白质层收集。
提取后，立即将超速离心管转移到50毫升管中丢弃。将收集的AAV-碘克沙醇悬浮液加入15毫升管中，并在PBS中稀释五倍，填充至15毫升。将悬浮液转移到离心过滤管中，并在4摄氏度下以3,428g离心10分钟。
弃去流通后，向滤液中加入15毫升PBS 5%蔗糖并重悬。从离心过滤管中收集浓缩的AAV。最后，将病毒等分试样储存在 4 摄氏度长达三个月。
