首先，对人子宫成纤维细胞进行 70% 至 90% 的融合培养。从烧瓶中吸出培养基。用 5 毫升温热的不含钙和镁的 DPBS 清洗细胞。
吸出 DPBS 后，将 4 毫升温热的胰蛋白酶 EDTA 移液到每个烧瓶中。将细胞在 37 摄氏度下孵育 3 到 5 分钟，直到细胞分离。接下来，向每个烧瓶中加入 6 毫升滴注和中和溶液。
然后将细胞悬液转移到 15 毫升锥形管中。使用移液管将悬浮液充分混合，并取 10 微升等分试样进行细胞计数。将 10 微升细胞悬液与 10 微升台盼蓝混合。
将染色的细胞悬液转移到血细胞计数器进行细胞计数。接下来，将细胞悬浮液在室温下以 300 G 离心 5 分钟。吸出上清液后，将沉淀重悬于温暖的成纤维细胞培养基中。
现在用 200 微升成纤维细胞培养基洗涤微流体器官芯片的基底通道。然后用 200 微升温热的阴道上皮培养基清洗顶端通道。向根尖通道入口加入 200 μL 完全阴道上皮培养基，同时用移液器吸头堵住出口。
分配培养基，直到入口和出口尖端体积相等。然后从移液器中释放移液器吸头，将吸头留在入口中。缓慢吸取 50 微升人子宫成纤维细胞悬液到基底通道入口，同时从出口吸出。
当大约两微升的细胞悬液留在移液器吸头中时，从入口处取出移液器吸头。将塞子芯片倒置在 15 毫升管架上。孵育后检查芯片是否有细胞附着。
接下来，用移液器吸头塞住基底通道的出口。然后将 200 微升成纤维细胞培养基加入基底通道入口，而不向下推移液器柱塞。从移液器中释放吸头，使培养基通过重力流通过通道自由流向出口移液器吸头。
将成纤维细胞接种的芯片在 37 摄氏度下用 5% 的二氧化碳补充剂孵育过夜。
