首先，标记两个毫升微型离心管。将 50 μL 等分试样的大肠杆菌 DnaK756 培养物移液到试管中。将试管放在冰上。
将 10 至 50 纳克质粒 DNA 加入每个单独的管中，并加入大蒜杆菌等分试样。将试管放在冰上 30 分钟。接下来，将细胞置于 42 摄氏度 60 秒以热休克细胞。
将试管放回冰块中 10 分钟。将 950 微升新鲜的 2 倍酵母胰蛋白胨肉汤倒入试管中，然后在 37 摄氏度的振荡器中孵育试管。移液 100 微升转化的细胞培养物，并将它们涂抹在琼脂平板上，其中含有两倍酵母胰蛋白胨含有抗生素。
将其余细胞在4摄氏度下以5,000G离心一分钟。倒出约 800 微升肉汤。将沉淀的细胞重悬于剩余的培养基中。
将回收的细胞铺在两倍酵母胰蛋白胨琼脂平板上，然后在37摄氏度下孵育两个琼脂平板过夜。要对细胞进行铺板，请使用无菌环从转化体中取出单个菌落。将其接种到10毫升两次酵母胰蛋白胨肉汤中，并辅以抗生素。
现在，在两毫升微量离心管中准备从100到10到负五分之一的细胞的连续稀释液。在发现细胞之前，将补充有抗生素和 IPTG 的琼脂平板放入 40 摄氏度的烤箱中，盖子部分打开。一旦平板足够干燥，将两微升连续稀释的细胞点在琼脂平板上。
将每个样品点在两个单独的板上。在37摄氏度的允许生长温度下孵育一块板，在43.5摄氏度的非允许生长温度下孵育另一块板。为了确认重组蛋白的表达，使用无菌环从同一转化子集落中拾取部分剩余细胞。
将细胞接种到10毫升补充抗生素的酵母胰蛋白胨肉汤中。将培养物在37摄氏度的振荡器上孵育过夜。所有大肠杆菌 DnaK756 细胞都在 37 摄氏度的允许生长温度下生长。
然而，只有表达 DnaK 和 KPf 的异源细胞在非允许生长温度下生长。表达KPf-V436F的突变细胞仅在37摄氏度下生长，但在43.5摄氏度下无法生长。
