将纯化的膜蛋白重组为预形成的脂质体

首先，将脂质体的等分试样置于室温的水浴中以解冻囊泡。预平衡装有缓冲液 A 过滤器的挤出机，然后将解冻的脂质体放入挤出机 13 次。将挤出的脂质体收集在塑料管中，以最小化死体积。

接下来，将一毫升稀释的脂质体溶液移液到透明比色皿中。用分光光度计在 540 纳米处测量其初始光密度。向脂质体中加入 50 微升 10% Triton X-100。

当溶液达到最大光密度时，将其与 Triton X-100 滴定，直到获得 60% 饱和度的光密度。将洗涤剂不稳定的囊泡倒回塑料管中。接下来，将纯化的膜蛋白添加到不稳定的脂质体中，直到获得所需的 400 比 1 比例。

在 4 摄氏度下将样品章动 15 分钟。然后加入 200 毫克洗涤致密的去润湿聚苯乙烯珠以去除洗涤剂。现在将一个空的 10 毫升重力流柱固定在放置在冰上的空 6.5 毫升超速离心管上方。

将样品倒入重力流柱中，并将蛋白脂质体收集在超速离心管中。向珠子中加入 0.5 毫升缓冲液 A。将滤液收集在超速离心管中。

接下来，将脂质体放入超速离心机中进行浓缩。弃去上清液后，将沉淀的蛋白脂质体重悬于总体积为200微升的缓冲液A中，将蛋白脂质体的最终体积分成三个等分试样。少量的 Triton X-100 最初导致 540 纳米处的吸光度增加。

进一步添加导致囊泡的部分溶解。在我们的Rsol中，脂质体完全溶解。