mOrange-Nano 募集到 disiLID 功能化负载脂质双层 （SLB） 以生成蛋白质模式

首先，取一个微载玻片 18 孔玻璃底室，将 150 微升氢氧化钠加入室的每个孔中，并在室温下孵育一小时。然后除去离子水洗涤孔三到五次，然后用含有 10 毫摩尔氯化钙的缓冲液洗涤 3 次。接下来，将 15 微升新鲜制备的 SUV 加入含有 150 微升缓冲液和 10 毫摩尔氯化钙的孔中。

在室温下孵育 30 分钟后，用不含氯化钙的缓冲液洗涤 SLB 至少 7 次。对于具有链霉亲和素的生物素化SLB的功能化，加入链霉亲和素溶液。然后用缓冲液洗涤 SLB 至少五次，以去除多余的链霉亲和素。

接下来，将 b-disiLID 加入孔中，终浓度为 1 微摩尔。在室温下孵育 30 分钟后，用缓冲液洗涤多余的蛋白质至少五次。然后将 mOrange-Nano 加入至终浓度为 200 纳米摩尔。

用铝箔覆盖样品并保持在黑暗中。之后，将微载玻片置于荧光显微镜下。设置 552 纳米激光器以可视化 mOrange-Nano。

荧光显微镜显示 mOrange-Nano 在用 b-disiLID 功能化的 SLB 上图案化。光激活后，感兴趣区域内的橙色通道中的荧光信号会迅速增加。每次光激活后，mOrange-Nano 的荧光在 120 秒内饱和后增加，然后在接下来的 120 秒内降至背景水平。