从小鼠淋巴结和脾脏中纯化 CD8+ T 细胞以进行动力学研究

首先，将安乐死的小鼠仰卧在解剖板上。使用解剖 T 形销将鼠标的脚垫固定到板上。用外科解剖剪刀切开下腹部，切开到下巴。

将皮肤与腹膜衬里分离后，将其垂直拉伸到远离躯干的地方并将其固定下来。使用钝钳小心地切除颈部、轴向、肱部和腹股沟淋巴结以及脾脏，并将它们放入含有 2 毫升 R9 培养基的 70 微米细胞过滤器中。要制备单细胞悬液，请反复将组织破碎工具顺时针和逆时针旋转半圈。

用 5 毫升介质清洗过滤器。然后，将细胞悬液转移到 15 毫升锥形管中并离心。倾析上清液后，向试管中加入 500 微升裂解缓冲液以去除红细胞。

一分钟后，将细胞与 9.5 毫升 R9 培养基混合。离心管。并彻底倒出上清液。

接下来，将细胞沉淀重悬于含有抗 MHC2 和抗 CD4 抗体的 10 毫升阴性选择培养基中，并将试管置于摇臂中 30 分钟。将细胞以 270G 沉淀 5 分钟后，倒出上清液。同时在15毫升锥形管中，洗涤200微升羊抗大鼠和免疫球蛋白G珠在7毫升培养基中。

将管子放在磁铁上，然后取出介质。再洗涤两次后，将珠子重悬于 7 毫升 R9 培养基中。然后，将 7 毫升珠子悬浮液与细胞沉淀混合，并将试管在摇床上孵育。

要去除抗体珠结合的细胞，请将锥形管直接放在磁铁上三分钟。将细胞悬浮液吸入一个新的 15 毫升管中，将管保持在磁铁上。沉淀富集的 CD8 阳性细胞，并在培养基中洗涤 3 次。