首先,将所有传真文件导入到分析仪表板中。打开其中一个文件以查看前向散射侧散射图。构建一个多边形门来隔离完整的像元,避免在图的左下角出现碎片。
将亚群标记为完整细胞,并将此门拖动到所有样本条。使用“下一个样品”按钮验证每个样品的设门。双击阴性对照样本的完整细胞亚群以显示新图。
将绘图轴调整为 X 轴上的 FL1-H 表示 GFP,将 Y 轴上的 FL2-H 调整为 mCherry。接下来,选择四门控工具,然后单击负细胞群的右上角。将四个矩形门拖动到完整的单元格条上。
使用下一个样品按钮检查 GFP 或 mCherry 单色对照的每个样品,以确保正确设门。导航到布局编辑器。在这里,选择具有代表性的绘图,然后选择复制到布局编辑器。
选择所有具有代表性的图,然后双击以打开图形定义。将 X 轴标签命名为 GFP,将 Y 轴标签命名为 mCherry。通过比较同一图中GFP阳性细胞的数量与mCherry阳性细胞的数量来确定相对DNA修复效率。
实施了适当的薪酬调整和门控策略,以确保NHEJ和HR分析的准确性。该策略将 GFP 阳性细胞定位在右下象限,将 mCherry 阳性细胞定位在左上象限。GFP阳性细胞的百分比表明DNA DSB修复和转染效率。
相反,mCherry 阳性细胞的百分比仅反映了转染效率。DNA DSB 修复效率计算为 GFP 阳性细胞与 mCherry 阳性细胞的比率。此外,使用 shCONTROL 和 shWASH 细胞的 NHEJ 测定证明了 Wiskott-Aldrich 综合征蛋白和 SCAR Humalog 或 WASH 蛋白在 DNA 修复中的作用。
水、环境卫生和个人卫生(WASH)的丧失降低了国家卫生和个人卫生项目的效率,突出了其在促进国家卫生和个人卫生方面的作用。