首先，将 1 至 2 毫升的抗粘附冲洗溶液移液到 15 毫升锥形管中。旋转管子以涂覆其表面。接下来，在去除抗粘附溶液后，将 5 毫升 DPBS 溶液移液到管中。
盖上涂层管，直到需要。移出含有人肠道类器官穹窿的板中的任何培养基。用一毫升移液管，将一毫升冷的 DMEM/F-12 培养基直接加入圆顶，使其从板上分离。
吸取另一毫升培养基以收获任何剩余的类器官。将悬浮液转移到涂层的 15 毫升锥形管中。上下吸取悬浮液以崩解类器官，直到产生具有所需类器官大小的均匀片段悬浮液。
接下来，用吸液吸取悬浮液的等分试样进行计数。将剩余的悬浮液放在冰上。在平底 96 孔板的每个孔的底部绘制 XY 网格。
将 50 微升 DPBS 移液到孔中。将 5 微升等分试样转移到每个孔中。手动计算直径为 50 至 200 微米的类器官总数。
然后使用给定的方程式计算类器官悬浮液的体积。计数类器官后，从含有剩余团块悬浮液的管中取出上清液和混浊层。然后将两毫升冷的 DMEM/F-12 直接移液到颗粒上。
在室温下以 200 G 离心悬浮液 5 分钟。对于动物源性系统，添加 40 微升冷的 1 种动物源性基质类器官颗粒。上下移液类器官，将它们分布到基质中。
轻轻地将基质类器官混合物转移到无菌、预热的 24 孔组织培养板的中心。将板在 37 摄氏度下孵育 30 分钟，以确保圆顶凝胶化。接下来，将 0.5 毫升温热的肠道类器官生长培养基移液到孔的两侧，在孵育前不会干扰圆顶。
对于基质四无异种类器官系统，向球状体颗粒中加入 50 微升 3X 类器官生长培养基。然后吸取 100 微升选定的基质四种无异种有机器官到悬浮液中。将 40 微升水凝胶类器官混合物加入 24 孔组织培养板的中心。
将板在 37 摄氏度下孵育 30 分钟。孵育后，沿孔两侧吸取 0.5 毫升类器官生长培养基。然后在 37 摄氏度、5% 二氧化碳补充和 95% 湿度下再次孵育板。
