首先,洗涤 RNA-模板 C-star 缩合物,让提取的缩合物溶液沉淀至少 5 分钟。然后,从液位顶部移液以尽量减少冷凝物去除,提取大约一半体积的上清液。在 tris-EDTA 中加入相同体积的 0.3 摩尔氯化钠以替换去除的上清液,并通过移液混合。
重复上清液去除和缓冲液更换的循环,总共三个循环。对于 T7 转录混合物,制备 10 毫摩尔 DFHBI 的二甲基亚砜储备液。然后使用不含 RNAse 和 DNAse 的水将等分试样稀释至终浓度为 600 μmol。
在冰上解冻转录试剂盒组分。然后使用无菌移液器吸头,在室温下将显示的组分移液到高压灭菌的微量离心管中。通过移液轻轻混合溶液,并立即用于合成 RNA 转录本。
为此,将 3.3 微升由 RNA 模板化 C-Stars 制备的洗涤冷凝物移液到适合显微镜成像的腔室中。并加入新鲜制备的转录混合物的总体积。采集显微镜图像 18 小时,在将转录混合物添加到冷凝物中后立即开始。
对于 RNA 适配子的转录,通过显微镜观察荧光随时间增加证实了成功的结果。