SW1222 细胞系来源的结直肠癌类器官在超短自组装肽基质中的制造

首先，将 10 微升 2X 肽溶液液滴移到 24 孔板的孔中心。孵育后，向每个孔中移取 10 μL 2X PBS。使用移液器的尖端轻轻混合溶液，让凝胶液滴稳定至少 20 分钟，确保液滴完好无损。

接下来，将 2.5 毫升 0.0125% 胰蛋白酶 EDTA 移液到含有 200 万个 SW1222 人结直肠腺癌细胞的培养瓶中。将细胞与胰蛋白酶在 37 摄氏度下孵育 5 到 10 分钟，直到它们从培养瓶中分离。加入 5 毫升完全培养基以灭活胰蛋白酶。

然后使用 30 微米的细胞过滤器过滤细胞悬液。使用 10 μL 微量移液器，在每个肽液滴中注入 2 μL 细胞悬液。将来自 SW1222 细胞系的 800 个细胞接种到每个孔中，持续 4 天。

将液滴在 37 摄氏度下在 5% 二氧化碳下孵育 30 分钟。然后向每个孔中加入 0.5 毫升补充培养基。为了制备对照，用补充培养基稀释基底膜基质对照的原液。

将细胞悬液加载到稀释的膜基底溶液中。将 20 微升稀释的基底膜基质与细胞一起移液到每个孔中。将细胞在 37 摄氏度下孵育 20 分钟。

液滴凝固后，加入 0.5 mL 完全培养基。在第 1 天、第 4 天和第 7 天使用明场显微镜对细胞进行成像，以评估类器官的生长。细胞的一周明场成像显示，小细胞簇正在组装成类器官。

在肽水凝胶中培养的 SW1222 衍生类器官具有圆形形态和浅色外观。较暗的外观表明不需要的高密度，如第 7 天肽 P 中的菌落所示。