肽水凝胶中结直肠癌衍生类器官的免疫染色

首先，将 20 微升肽水凝胶液滴移入 24 孔板中。将来自 SW1222 细胞系的 800 个细胞接种到每个孔中，持续 4 天。第 4 天，移出培养基。

用 PBS 洗涤每个孔两次。然后，向孔中加入 400 微升 4% 甲醛溶液。孵育完成后，使用 P1000 移液器吸头吸出甲醛溶液。

然后，再次用 PBS 洗涤孔。将细胞在 1 mL 透化缓冲液中在室温下孵育 30 分钟。移出缓冲液并用 PBS 洗涤孔后，加入 0.5 毫升封闭缓冲液。

现在，去除封闭缓冲液后用 PBS 洗涤孔。然后，将 200 μL 稀释的一抗移液到孔中。将板在 4 摄氏度下孵育过夜。

使用 P200 移液器吸头，取出溶液。然后，用 PBS 溶液洗涤孔。接下来，将鬼笔环肽偶联物按1：40的比例加入一小瓶稀释的二抗中。

将此混合物移液到板的孔中。然后，将板在室温下避光孵育 3 小时。吸出溶液并用 PBS 洗涤孔后，将 300 微升 DAPI 溶液移液到每个孔中。

孵育后，吸出溶液后再次用 PBS 洗涤孔。将板在 4 摄氏度下存放长达 7 天。免疫染色显示，在非生物功能肽 P 、生物功能化肽 P1 和 Matrigel 中发现的类器官位于顶端和基底外侧膜。

非生物功能肽 P 诱导基底外侧膜中的细胞间连接表达。