从 Notexin 受伤小鼠中分离的骨骼肌细胞的活/死染色，顺铂和多聚甲醛固定

首先，将从 Notexin 受伤的小鼠中分离的骨骼肌细胞重悬于一毫升冷血清游离 DMEM 中，并使用血细胞计数器或细胞计数器对其进行计数。在通风橱下，加入顺铂原液以达到 25 微摩尔的最终浓度。涡旋试管 10 秒，并在室温下孵育 1 分钟。

用含有 10% FBS 的冰冷 DMEM 淬灭反应，并将其置于冰上。沉淀并重悬细胞后，通过 35 微米细胞过滤器过滤悬浮液。在通风橱下，加入过滤后的多聚甲醛储备液以固定细胞悬液并涡旋 30 秒。

用 2 毫升细胞染色培养基或 CSM 离心洗涤 2 次。最后一次洗涤后，将上清液吸出约 60 微升，并彻底重悬沉淀。加入 40 μL 在 CSM 中制备的 2.5 倍表面抗体染色混合物，孵育 1 小时，同时每 20 分钟涡旋一次。

用 CSM 洗涤样品两次后，吸出上清液并轻弹沉淀。为了透化细胞，在通风橱下，涡旋时滴加 0.5 毫升冰冷的甲醇。通过离心用 1 ml CSM 洗涤细胞两次。

最后一次洗涤后，将上清液吸出约 60 μL，并彻底重悬沉淀。将细胞与 40 μL 细胞内抗体染色混合物一起孵育 1 小时，同时每 20 分钟涡旋一次样品。用 1 ml CSM 洗涤细胞两次后，将样品重悬于 0.5 ml 插层铱溶液中并涡旋。