用于分离人乳腺上皮细胞的乳腺组织消化

首先解离组织。使用两对镊子从乳腺组织中取出脂肪组织。确保剩余的乳腺组织重约 1 克。

用 5 毫升 75% 乙醇溶液冲洗乳腺组织 5 秒钟。然后，用 20 毫升洗涤液洗涤 2 次，每次 5 分钟。然后，使用两个手术刀片将乳腺组织切成更小的碎片。

连续 15 分钟以获得组织匀浆，将切碎的组织转移到 50 毫升离心管中。加入 10 毫升分散酶和胶原酶溶液、3 毫升 0.25% 胰蛋白酶和 7 毫升 PBS，总共 20 毫升消化液。将试管置于 37 摄氏度的水浴中，孵育 1 1/2 小时，每 20 分钟摇动一次试管。

要停止消化过程，请加入 20 毫升中和溶液。然后，移液将内容物移液约 15 次以确保充分混合。通过 100 微米网状过滤器过滤混合物。

之后，以 156G 离心 5 分钟。然后，去除上清液。将沉淀与 20 mL 中和溶液重复孵育，然后通过移液混合。

再次离心 5 分钟。小心去除上清液，并用 10 mL 初始培养基重悬细胞沉淀。将细胞悬液接种在 100 毫米细胞培养皿中。

在 5 摄氏度的 37% 二氧化碳培养箱中培养细胞。每三天用新鲜的上皮细胞培养基替换原始培养基。检查单元格并每两天刷新一次培养基。

使用该方案，从乳腺组织中分离人乳腺上皮细胞。分离后分析显示，与对照组相比，用 ROCK 抑制剂 Y-27632 处理的细胞表现出明显的生长。CCK-8 测定显示，含有 Y-27632 的培养基中的细胞增殖速率显著高于对照培养基中的细胞。

免疫荧光测定证实，大多数细胞表达乳腺上皮细胞标志物 CK7 和 GATA3，在随后的传代中其他细胞类型的存在可以忽略不计。此外，qRT-PCR 研究表明，CK7 和 GATA3 在几次传代中的表达水平一致，表明表型或分化能力一致。