继续在解剖显微镜下从先前分离的胎儿头部收集大脑。使用弯曲的镊子握住鼻子,并使用 5 号镊子小心地从颅帽上剥下皮肤,使其附着在鼻子上以便于握住。保持相对于大脑约 75 度,沿中线运行镊子,直到发育中的颅骨部分的透明膜向两侧移动。
将镊子平行于颅骨移动,将其插入颅骨帽下方,然后捏住并剥向一侧。去除一侧后,用镊子抓住另一侧并剥到另一侧。用微型勺子轻轻地将大脑从颅骨中舀出。
将大脑转移到含有冷 PBS 的新鲜 60 毫米培养皿中。使用弯曲的镊子,用非惯用手将大脑保持在后脑和前脑的交界处。用惯用手握住手术刀,刀片平行于大脑表面。
然后用力按压皮质中部区域。仍然握住后脑,在后脑前面做第二个切口,将其与前脑分开。在中间部分,在腹面上寻找一个小的线性空间,即第三脑室。
用 5 号镊子小心地捏掉心室表面两侧的内膜,然后将其转移到新鲜、干净的 1.5 毫升微量离心管中。将试管快速放入冷冻安全的液氮容器中。