用于单细胞 RNA 测序和代谢组学的恒河猴胰岛细胞分离

首先，在冰上解冻分离的恒河猴胰岛组织。向组织沉淀中加入 500 μL 0.1X 裂解缓冲液。使用一次性无 RNase 的沉淀杵，在冰上轻轻匀浆组织 15 次。

将样品在冰上孵育 10 分钟。然后，向匀浆中加入 500 微升洗涤缓冲液，并在冰上用移液管轻轻混合。用 300 毫升洗涤缓冲液灌注 30 微米的预分离过滤器，然后将 1 毫升细胞匀浆过滤到 5 毫升的试管中。

将过滤后的匀浆在 4 摄氏度的水平桶离心机中以 500 g 离心 5 分钟。使用移液管将 1 毫升上清液转移到冰上的冷冻管中，并立即将其冷冻在零下 80 摄氏度以备将来的代谢组学实验。向细胞核沉淀中滴加 1 毫升洗涤缓冲液以重悬。

将洗涤后的颗粒在 4 摄氏度的水平桶离心机中以 1， 000 g 离心 5 分钟。重复洗涤后，将细胞核重悬于 1 mL 洗涤缓冲液中。用移液管将细胞核悬液和 0.4% 台盼蓝各 10 微升混合在一个单独的试管中，然后将混合物添加到自动细胞计数载玻片中。

最后，使用细胞计数仪测定细胞核浓度。获得理想的完整细胞核用于测序实验。基于基因表达研究，获得了离体胎儿、非人灵长类动物胰岛内细胞亚型的 UMAP 聚类。

胰岛代谢物丰度，如磷酸二羟基丙酮、3-磷酸甘油、2-氧代戊二酸、肌酸和谷胱甘肽是使用胞质组分获得的。