首先,使用血清移液管将 2 毫升高压灭菌溶原肉汤培养基分配到两个无菌 14 毫升试管中。层流罩内。用微量移液管将 20 微升过滤灭菌的 5% Tween 80 添加到试管中。
接下来,将耻垢分枝杆菌的低温库存添加到带有接种环的试管中。将试管在摇床培养箱中以每分钟 300 转和 37 摄氏度的速度孵育 48 小时。为了制备二次培养物,将 2 毫升高压灭菌溶原肉汤培养基分配到两个无菌 14 毫升试管中。
然后使用微量移液器向试管中加入 20 微升经过 5% 吐温 80 的过滤器消毒。接下来,用微量移液器将 20 微升原代培养物转移到其中一个试管中。在振荡培养箱中以每分钟 300 转和 37 摄氏度的速度孵育培养物,直到它们达到 0.6 至 0.8 的 OD 600。