首先,用 30 ml AC6 培养基填充 T75 培养瓶。在无菌条件下将含有棘阿米巴的样品瓶的内容物加入培养瓶中。在 26 至 30 摄氏度下孵育培养物 3 至 5 天,直到培养瓶达到 50% 至 80% 汇合。
在需要细胞的前一天,摇动并轻快地敲击主培养瓶两次,以去除贴壁滋养体。用 30 mL AC6 培养基填充新的 T75 培养瓶。然后将 2 毫升主培养物转移到培养瓶中。
将培养物在 26 至 30 摄氏度下孵育 18 至 24 小时。收获前,使用放大 4 倍的显微镜目视检查滋养体种群的粘附性和均匀性。轻快地敲击培养瓶两次,以去除粘附的滋养体。
然后将内容物倒入 50 毫升锥形管中。将试管以 500 G 离心 5 分钟,使变形虫沉淀。弃去上清液后,将上颚重悬于 2 至 10 毫升的四分之一林格氏溶液中。
涡旋重悬样品以确保混合均匀。然后将 10 μL 样品转移到一次性血球计数器中。计算每毫升的菌落形成单位。
加入林格溶液,将变形虫沉淀稀释至所需浓度。接下来,将变形虫接种在孔板上。要将变形虫接种到无菌铝制流通池中,请通过流通池的无菌端口缓慢加入 4 毫升悬浮液。
然后夹紧端口。