首先，使用移液器，在薄层色谱 （TLC） 板底线上标记的点上点取 5 微升每种提取物，相距 2 厘米。让斑点在 TLC 板上干燥并重复，直到将大约 5 毫克的每种提取物加载到板上。在 TLC 显影罐中制备二氯甲烷和甲醇的 1：2 溶液。
将 TLC 板放入显影槽中并显影，直到溶剂到达距板顶部两厘米标记的线。显影后，从水箱中取出 TLC 板。立即在溶剂线上方的点上点上发现阳性对照。
在所有溶剂蒸发之前，将板放入乙醇灭菌的 TLC 板盒中。使用无菌金属刮刀刮擦五个病原体板的菌丝垫。然后，将其转移到 50 毫升离心管中。
加入 25 毫升用琼脂修饰的马铃薯葡萄糖肉汤后，将无菌玻璃珠加入试管中，涡旋 5 分钟以打碎菌丝垫。在罩中组装色谱喷雾器后，连接管道。然后，将流量计连接到装置上。
使用带有针尖的无菌注射器将菌丝体悬浮液转移到色谱喷雾器中，以确保大块菌丝体不会堵塞喷雾器。将先前开发的 TLC 板放在层流罩中的无菌纸巾上，以减少手与板的接触，同时应用培养基悬浮液。将病原体样品连接到组装好的喷雾器上，并在 TLC 板上涂上三层悬浮液，让板在两次应用之间完全干燥。
接下来，将 50 毫升无菌水加入消毒的塑料板盒中，准备孵育设置。将四个培养皿放入其中，以便 TLC 板位于上面。此外，在盒子的每一侧放置经过消毒的折叠纤维素片或滤纸以保持水分。
将完成的分析板放在盒子中的四个空培养皿上。孵育测定 3 天到 1 周，或直到在整个板上生长均匀的菌丝体层，阳性对照和抑制区周围除外。然后，使用金属勺子将二氧化硅从抑制区刮下，并将其放入微量离心管中。
向每个试管中加入 500 微升甲醇并涡旋以从二氧化硅中提取代谢物。离心试管以沉淀二氧化硅，并将上清液转移到液相色谱样品瓶中进行分析。紫外光下的成像显示 TLC 板上代谢物的分离。
孵育后，病原体似乎在整个平板上均匀生长，除了阳性对照和抑制区。
