首先，在解剖显微镜下将正式且固定的小鼠眼睛放在一张蜡纸上。用一对微型镊子握住肌肉和视神经的残余部分。然后调整眼睛的方向，使角膜朝向一侧。
现在使用手术刀片在角膜缘后面并平行于角膜缘做一个 1 到 2 毫米长的切口。用刀片向下施加力，同时将眼睛保持在原位，直到眼前段与后端分离。然后丢弃眼前段和晶状体。
将后段转移到装满 PBS 的 6 厘米培养皿中。使用微型刮刀舀出视网膜，同时用微型镊子固定视神经。要冲洗视网膜，请将其转移到 12 孔板的孔中，该孔板有 6 个装满双蒸水的孔。
使用 P1000 移液器小心地在视网膜附近上下移液，同时吹水以引起轻微的搅动。接下来，使用倒置玻璃移液器将视网膜转移到第二个孔中。为了消化视网膜，用倒置玻璃移液管将冲洗过的视网膜转移到 12 孔板中的胰蛋白酶溶液中。
将胰蛋白酶浸泡的 P200 移液器吸头置于视神经的中心。然后轻轻地上下移液整个血管网络以解离非血管组织。现在，使用用胰蛋白酶预先冲洗的倒置玻璃移液器将视网膜脉管系统转移到六孔板中含有双蒸水的孔中。
旋转板，然后用倒置胰蛋白酶冲洗的玻璃移液器上下移液管系统，以去除任何残留的非血管组织。小心地将视网膜脉管系统转移到带电表面显微镜载玻片上标记区域的中心。然后使用 P200 移液器小心地去除一侧边缘的多余水分。
将玻片放入靠近正面的生物安全柜中，让残留的水蒸发。当脉管系统几乎干燥时，将其转移到相差显微镜下。使用 P200 移液器在标记区域的一侧缓慢添加双蒸水，以小心地为脉管系统补充水分。
固定孤立的视网膜脉管系统导致结构坚固且足够耐用的组织，适合 AFM 测量。相比之下，从未固定或短暂固定的眼睛中分离出来的视网膜血管变得碎片化和塌陷。
