首先，生成每个报告基底并使用分光光度计检查其浓度。获得 200 ng 报告基因底物。在含有荧光双链 DNA 染料的 0.7% 琼脂糖 TAE 凝胶中，将每个报告基因底物与高分子量 DNA 分子量标准一起电泳。
验证是否观察到 reach 报告基因底物的定义条带大小正确。如果评估化合物对报告基因分析的影响，将溶解在载体中的化合物分配到 96 孔板的孔中。为了制备用于 96 孔板的转染混合物，在 1.5 mL 试管中的 500 μL 转染缓冲液中稀释 Firefly 对照质粒和 NanoLuc 双链断裂修复报告基因底物。
加入脂质体碱基转染试剂后，短暂涡旋 DNA 混合物，并在室温下孵育 10 分钟。要收获细胞，请用胰蛋白酶消化并重悬于含有 10% 胎牛血清或 FBS 的新鲜培养基中。然后，测定细胞计数，并在新鲜的 15 毫升试管中，在 8.5 毫升含 FBS 的培养基中以 6 个细胞的幂次方重悬 3 次 10。
将 DNA 转染混合物加入细胞悬液中，并将试管倒置数次以混合。每孔接种 80 μL 细胞悬液，并将 96 孔板在 37 摄氏度和 5% 二氧化碳下孵育 24 小时。根据制造商的说明准备对照荧光素酶和报告荧光素酶试剂。
将底物以 1 比 100 的比例加入适当体积的测定缓冲液中并混合。板和试剂达到室温后，每孔添加 80 μL 对照 Firefly 荧光素酶试剂。在轨道摇床上以每分钟 450 转的速度摇动板 3 分钟。
将板放入发光读板器中，并测量对照荧光素酶发光信号。要测量报告基因荧光素酶信号，每孔添加 80 微升 NanoLuc 报告基因荧光素酶试剂。在轨道摇床中以每分钟 450 转的速度孵育 3 分钟后，将板在室温下静置 7 分钟。
最后，在发光读板器中测量报告基因荧光素酶发光信号。对 NanoLuc 和 Firefly 发光信号分量的评估表明，观察到的修复缺陷是由 NanoLuc 信号的减弱驱动的，而 Firefly 控制信号不受干扰。
