离体原肠鼠胚胎的当天基因分型

从小鼠胚胎中分离出内脏卵黄囊后，继续在 8 条聚合酶链反应或 PCR 管中消化每个卵黄囊。使用 P20 移液器，向每个卵黄囊样品中加入 19.3 μL PCR 模板 DNA 裂解缓冲液和 0.7 μL 0.2 μg/mL 蛋白酶 K。涡旋样品 10 秒钟。

并使用带有试纸条适配器的微型离心机，将样品以 1000 G 离心 10 秒。将 8 联排 PCR 管置于 85 摄氏度的加热块中 45 分钟，同时每 5 分钟涡旋 5 秒。45 分钟后，再次以 1000 G 离心试管联排 10 秒，然后进行 PCR 以获得所需的基因鉴定。

为了进行 Cre 基因分型的 PCR 反应，为每个卵黄囊准备一个 PCR 预混液，其中包含每 8 条 PCR 管中显示的组分。使用显示的循环继续运行 PCR 热循环扩增程序。然后在 1% 琼脂糖凝胶上运行 PCR 产物以得出基因分型结论。

将剩余的消化卵黄囊样品储存在零下 20 摄氏度的冰箱中，以便长期储存。当 PCR 产物在琼脂糖凝胶上分离时，可以看到 LoxP 和野生型等位基因以及 Cre 等位基因的预期片段大小。