将克罗恩病患者来源的结肠样细胞孵育三天后，倾斜板并从孔边缘取出培养基。每孔添加 200 微升含有 2.5 微摩尔荧光细胞死亡染料的细胞因子处理培养基。在 37 摄氏度和 5% 二氧化碳下孵育结肠素所需的处理时间。
孵育后，将板转移到数字倒置落射荧光显微镜的载物台上，并确认最大毒性条件结肠素已完全裂解。使用传输通道，专注于具有 SYTOX 阳性细胞的结肠样体。然后，切换到 GFP 通道。
调整光强度和曝光时间，以最大化荧光信号，同时最小化背景。使用优化的图像设置，观察无染料和最大毒性条件，以确保样品不会曝光过度或曝光不足。通过选择遵循覆盖结肠样圆顶的固定网格模式的视野，使用随机采样方法获取结肠的透射和 GFP 图像。
以便携式网络图形格式存储图像并导出它们。将图像数据集文件拖放到 ImageJ 工具栏上，然后依次单击 Image、Stacks 和 Images to Stack 以合并文件。然后，点击 图片 其次 房屋类型 和 8 位 将图像堆栈转换为 8 位文件。
单击手绘选择工具，然后手动选择透射图像上的感兴趣区域。然后，在图像堆栈之间切换到相应的 GFP 通道图像。在工具栏中，单击 Analyze and Set Measurements。
在 Set Measurements （设置测量） 对话框窗口中，勾选 Mean gray 值，并取消勾选其他框。选择 GFP 映像后，单击 Analyze and Measure。分析数据集后，复制结果窗口中的所有数据并将其粘贴到电子表格中。
计算每个条件的技术仿行平均灰度值的均值。从每个治疗条件中减去未处理病症的平均值。然后，将每个治疗条件除以最大毒性条件的背景减去平均值。
要计算处理后的细胞活力，请从 1 中减去标准化值。使用给定的方程，计算 perturbagen 交互系数。8 小时时结肠样体的透射荧光叠加图像表明，只有干扰素 γ 加 TNF α 处理的结肠样结肠对荧光信号呈阳性。
24 小时时，用干扰素 γ 加 TNF α 处理的结肠样结肠显示出荧光信号阳性的大区域，结肠样形态明显分解。BSA 对照结肠样化合物在 8 小时内的细胞死亡水平较低，而 TNF α 处理的条件略有增加。在 24 小时时，干扰素 γ 加 TNF α 处理的结肠样化合物显示出最高的细胞死亡水平。
CPI 值表明 8 小时时有轻微的协同作用，24 小时时有很大的协同作用。这证实了干扰素 γ 和 TNF α 之间的时间依赖性协同相互作用。
