细胞骨架染色分析 MSC-Mito-GFP 和 ARPE19-Mito-RFP 共培养中 TNT 的形成和线粒体转移

首先，取共培养的 MSC-Mito-GFP 和 ARPE19-Mito-RFP 细胞，并从 24 孔板中取出培养基。用每孔 500 μL 的 4% 聚甲醛洗涤所有细胞一次。加入 500 微升新鲜的 4% 聚甲醛，固定样品 20 分钟。

然后去除固定剂，用 DPBS 洗涤样品 3 次，每次 10 分钟。去除 PBS 后，每孔加入 500 μL 封闭溶液，并在室温下孵育 1 小时。然后去除阻塞溶液。

要制备鬼笔环肽染色溶液，请用 PBS 将 400x 储存溶液稀释至 1x。向每个孔中加入 200 μL 鬼笔环肽染色溶液，并在室温下孵育 1 小时。然后回收染色溶液，并用 DPBS 洗涤样品 10 分钟。

取出 PBS 后，用注射器针头取出盖玻片并风干。在载玻片上涂抹少量封固剂，然后小心地翻转载玻片上的盖玻片，以确保介质均匀地覆盖整个表面。用指甲油密封边缘。

观察到隧道纳米管或 TNT 结构，在相似和不同的细胞类型之间建立细胞间连接。在含有来自 MSC 的绿色点状荧光的 ARPE-19 细胞和含有来自 ARPE-19 细胞的红色点状荧光的 MSC 中观察到线粒体转移。超分辨率成像证实了 TNT 的形成和通过 TNT 进行的详细线粒体转移。

定量显示，与 ARPE-19 细胞相比，MSC 捐献线粒体的能力明显更强。