生成人视网膜类器官并与小胶质细胞共培养，用于疾病建模和药物筛选

首先，从人胚胎干细胞中获取人小胶质细胞，并在第 56 天收获它们。对于视网膜类器官衍生，在干细胞培养基中培养人胚胎干细胞，直到细胞密度达到 80% 至 90%每孔向培养细胞中加入 1 毫升分散酶，并在 37 摄氏度下孵育 5 分钟。去除分散酶后，向每个孔中加入 1 毫升培养基 D。

将细胞切成小块。用 10 μL 移液器将所有细胞碎片和培养基轻轻收集到 1.5 mL微量离心管中。将试管以 200 x g 离心 5 分钟。

去除上清液后，将细胞轻轻重悬于 200 μL 的冷基质中。将 1.5 mL 微量离心管移至培养箱中 20 分钟。在培养箱中放置 20 分钟后，基质将凝固。

用 15 毫升培养基 D 准备一个 10 厘米的培养皿，用培养基 D 重悬基质并轻轻摇动培养皿。将培养皿放入培养箱中 5 天。在第 12 天，用 3 mL 分散酶替换培养基。

5 分钟后，吸出分散酶并加入 15 毫升培养基 E.在第 12 天将收获的小胶质细胞引入消化的视网膜类器官中。第 19 天，轻轻旋转板以将类器官聚集到培养皿的中心，并用培养基 F 替换培养基 E.最后，将含有培养基 F 的类器官转移到新的悬浮培养皿中。到第 30 天，与小胶质细胞共培养的视网膜类器官显示出显著的 GFP 自发荧光，表明存在小胶质细胞。

共培养的视网膜类器官对感光器标志物 CRX 和小胶质细胞标志物 IBA1 显示出清晰的免疫荧光信号。