在组织培养插入物中制备透明质酸-胶原蛋白水凝胶，用于复制胶质瘤肿瘤微环境

首先，将胶原蛋白、氢氧化钠、无菌超纯水、10 倍 PBS、一个微量离心管、甲基丙烯酸透明质酸和光引发剂置于冰上。然后将组织培养插入物放入板中并标记。要制备每毫升 3 毫克胶原蛋白溶液，请将高浓度胶原蛋白、一种普通氢氧化钠、超纯水和 10 倍 PBS 混合。

将组分添加到微量离心管中，并在混合时将移液器吸头浸没，以防止形成气泡。之后，在室温下以 200 G 离心细胞 5 分钟。然后从每个细胞条件溶液的顶部轻轻去除多余的培养基，留下条件所需的培养基体积。

将这些溶液放在冰上。将计算体积的胶原蛋白溶液添加到每种细胞条件溶液中。接下来，在每种细胞条件溶液中加入计算体积的 1% 甲基丙烯酸化透明质酸，然后加入 17 毫克/毫升 LAP。

一次混合一个条件管，同时保持移液器吸头浸没以避免形成气泡，并向每个组织培养插件中加入 100 至 150 μL。现在以恒定电流打开 385 纳米紫外线灯。要对每块凝胶进行照片交联，请将每个孔暴露在紫外线下 45 秒，一次一块。

然后将板放在 37 摄氏度下 30 到 45 分钟以交联胶原蛋白。使用不含维生素 A 的 0.5% 和 2 倍体积和 1% 体积 B27 的星光基础培养基，将液体压力头应用于凝胶上。将培养基添加到孔板和组织培养小室中，以实现净零流量。

将板置于 37 摄氏度、5% 二氧化碳的环境中至少 18 小时或最多 5 天。