维持和接种 HEK293T 细胞以进行 Split-Rluc 质粒转染

首先，将HEK293T细胞保存在加湿培养箱中含有 10% FBS 的 DMEM 的培养基中。在显微镜下检查板的汇合度。当细胞达到大约 80% 至 90% 汇合时，去除培养基并用 10 毫升 DPBS 洗涤。

然后，从培养皿中取出 DPBS。用 1 毫升 0.05% 胰蛋白酶-EDTA 酚红处理细胞，并在 37 摄氏度下孵育细胞 3 分钟。从培养箱中取出板后，加入 9 mL 培养基以终止胰蛋白酶反应，并通过移液混合以去除任何残留的细胞。

现在，将细胞悬液转移到 50 毫升试管中。在室温下以 300 g 离心 5 分钟。去除培养基后，将细胞沉淀重悬于 1 毫升新鲜培养基中。

要在 6 孔板中接种细胞，请将所需体积的细胞与 13 mL 培养基混合在 50 mL 试管中。然后，将 2 毫升稀释的细胞悬液分配到 6 个孔中，轻轻敲击板的所有侧面以均匀分布细胞。之后，将板放入 37 摄氏度和 5% 二氧化碳的加湿培养箱中过夜。