聚乙烯亚胺 （PEI） 介导的 HEK293T 细胞转染和转染后细胞接种

首先，从培养箱中取出培养HEK293T。从每个孔中吸出现有培养基，并在每个孔中加入 2 mL 新鲜培养基。对于用分裂的 R 环质粒 DNA 转染细胞，将 DNA 和 PEI 混合在 200 μL DMEM 中，每个孔位于 1.7 mL 微量离心管中。

在 8 级快速涡旋 DNA 和 PEI 约 2 秒，以确保它们充分混合形成复合物。然后在微型离心机中短暂旋转。孵育后，将混合物滴到含有细胞的六孔板中的培养基表面。

轻轻敲击板以均匀分布混合物，然后在 37 摄氏度和 5% 二氧化碳的加湿培养箱中孵育 6 小时。然后，从培养箱中取出六孔板，吸出培养基，并用 2 毫升 DPBS 洗涤每个孔。去除 DPBS 后，加入 350 微升 0.05% 胰蛋白酶-EDTA 酚红。

孵育结束时，向每个孔中加入 1.7 mL 培养基以终止胰蛋白酶反应。现在，将细胞和培养基转移到 50 mL 试管中，并在台式离心机中以 300 G 离心 5 分钟。吸出培养基，并用 1 mL 新鲜培养基重悬细胞沉淀。

要将细胞接种在多聚-D-赖氨酸包被的 96 孔板中，请在 50 毫升试管中加入所需体积的细胞以及适当体积的培养基。使用多通道移液器，将 100 微升稀释的细胞悬液分配到 96 个孔中。将细胞在 37 摄氏度和 5% 二氧化碳中孵育 18 小时。